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第三十章 磕磕绊绊地起步

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  林萧然轻轻摇头,他已经打定主意,以后再与师姐打交道,虽可以继续刺激对方,撩拨火气,却要更加慎重,像这种给自己带来无限麻烦的事情,万万不能重现!

  这一次他确实爽了,也获得了自尊心点,可是收拾烂摊子也着实头痛,好像是以本伤人,最后弄得一地鸡毛。

  林萧然细胞培养的见识远超黄薇,尽管对方看似存在刁难的意思,他也不会真正感到为难,只是稍一思虑,就想到应对之策。

  “我们目前拥有的是原发细胞,培养方案亟待探索,却不一定要设定单一目标,可以同时引入细胞膜物质运输加以研究,如此一来,将大幅度提高实验效率,你以为如何?”

  黄薇听罢,眼前微露光芒,口中喃喃,“课题是细胞悬浮驯化及贴壁和悬浮状态膜运输研究,原发细胞贴壁生长,已经可以着手研究贴壁状态细胞膜运输特性,待实现细胞悬浮驯化,再完成余下实验,可是,细胞培养条件尚未优化,火急火燎进行这一步,有意义吗?”

  “影响肯定存在,但没有多么严重,最终取得的数据仍在许可范围之内,那点影响完全可以忽略!”

  有关细胞的膜运输,乍听起来很高大上,弄清原理就会发现没有多么玄奥,简单说来,膜运输是指将细胞外界物质输送至细胞内,或细胞内物质排出细胞的过程!

  细胞膜控制着一切物质的进出,比如细胞生长所须的养料,要经由细胞膜进入胞内,代谢终产物同样需要经细胞膜排至胞外,细胞膜是细胞最关键的屏障与门户。

  细胞膜的结构非常简单,由两层磷脂分子构成,中间嵌有特定蛋白,它非常薄,仅七纳米左右,与高端芯片电路仿佛!

  细胞膜如何控制物质进出呢?

  通常情况下,绝大多数小分子,比如水、多数离子、氨基酸及维生素,可以按照细胞内外环境的浓度差,自由扩散穿过细胞膜,而钾、钠、钙等重要离子及大分子,如蛋白,要通过主动运输进入细胞。

  很好理解,比如生活在大海中的鱼,海水虽然很咸,鱼肉含盐量却并不高,这就是细胞膜的功劳,限制了盐的随意渗入,可以说没有细胞膜,大海将不可能存在生物。

  我们一般认为,贴壁生长的细胞,膜运输的能力弱于悬浮培养,而初始细胞均以贴壁形式生长,这也是为什么在细胞培养中,要进行细胞的悬浮驯化,目的在于提升膜运输效率。

  “唉,提起膜运输实验,我的心里就是一阵烦闷,仔细想想,又觉得你说得没错,这两天看了一些相关资料,虽然还没有仔细研究,但明白无论工作量还是实验难度,提升了不止一个级别,以后有得苦吃喽!”

  “也不用特别担心,因为许多实验的重复性很强,只要熟练之后,就会发现并不是想象中那么困难,同时,我们也要有自知之明,清楚自己的定位,研究要有选择性,论文有说服力就好,不必追求完美,不必贪多……,否则容易撑着!”林萧然微笑道。

  “有选择性?”黄薇微微思索,随后拉开抽屉取出一摞文本,都是些没有整理的初始文献,“这是些有关维生素、氨基酸、葡萄糖和蛋白等,膜运输方面的文献,你觉得怎样取舍?”

  “有机的,无论小分子还是大分子,实验室没那个条件,舍了吧,只做溶解氧与钾离子好了!”林萧然早有决断,选出两项最容易实现的研究对象!

  可供研究膜运输效率的对象很多,无论自由扩散方式,比如水、氧气等,或者主动运输进入细胞的物质,如钾、钠、钙及蛋白等,都可供选择,不可否认,研究对象越多,实验结果就越有说服力。

  那么,是否应将更多因素纳入研究对象?

  这么想当然没有问题,只可惜,条件所限,即使愿望很美好,也必须慎之又慎,原因很简单,人力物力消耗不起!

  选择溶解氧监测是因为比较容易实现,细胞培养中,利用氧电极可以轻松获得溶解氧数据,再以时间为X轴溶解氧为Y轴,很容易绘制溶解氧曲线,得出结论。

  但溶解氧数据相对粗放,参考性较差,很难得出我们需要的结论,只能作为辅助参考数据,与之相比,我们更关心主动运输数据,如钾、钠、钙等离子的迁移,实验中,可以预设培养基特定离子浓度,接下来按时检测,可以得到相应数据。

  钾、钠、钙等离子的检测同样繁琐,大家都知道,钾、钠属于碱金属,它们不容易形成沉淀,需要通过特殊的方法检验,具体过程不再赘述,总之相当繁琐。

  而钙离子虽然容易沉淀,但它也容易络合,检测时,很难判定哪部分沉淀,哪部分转化成为络合物,同样不易获得有效检测结果,不是很好的研究对象,没有能力的情况下只能放弃。

  生物反应的重现性比较差,加之实验条件简陋,每一项数据会呈现较大的发散性,若选取研究对象太多,黄薇很难在毕业前得出有效结论,最现实的做法是尽可能精简实验,如此一来,论文虽然不是多么好看,最起码不会影响毕业。

  黄薇的性格是很傲气的,加之也翻阅了一些资料,有了一定见识,可是以她那点可怜的知识储备,在小师弟林萧然面前,依然无法提出多少反对意见,多数时候都在木然点头。

  做通了黄薇的工作,接下来的事情就简单了,他们很快进入实验讨论环节,也算不上讨论,因为多数情况下都是林萧然在说,黄薇在听。

  细胞实验说起来简单,真正准备起来也相当繁琐,简而言之,实验准备工作可以分为两部分。

  其一是材料,关键是细胞,细胞已经到手,但试剂、设备等也不容忽视,任何一项出现纰漏,都会影响实验的进展。

  试剂也不是那么简单,比如培养基,细胞培养基与微生物培养基存在着显著的差异,配方之类不提,单纯灭菌过程就完全不同。

  微生物的灭菌,通常采用高压灭菌锅,121℃、15分钟即可,非常简单,但细胞培养基就比较麻烦,只因许多成分不耐高温,只能采取过滤方法隔离杂菌。

  细胞培养基的准备,过滤同样至关重要!

  另外,细胞培养所需的条件也有别于微生物培养,它需要使用二氧化碳培养箱,而二氧化碳要提前到器材科领取!

  细胞培养基所需的牛血清和各种维生素等,器材科肯定没有,不急的话可以在器材科报备,等它采购,但是器材科的办事效率低到让你怀疑人生,好吧,最好自己联系商家直接购买!

  检测同样需要大量试剂,都需要准备妥当,否则实验开始了,却又发现短缺某些试剂,到时候只有哭的份儿了,无法检测,就意味着实验白做!

  实验方法同样关键,实验方法也是对实验过程的描述,它的存在不仅可以规范实验,还可以在一定范围内发现其中疏漏,实验步骤描述得越详实,出现疏漏的机率就越低。

  材料方面此时肯定无法处理,两人开始起草实验方法,起草工作由黄薇一人承担,这也是林萧然特别强调的,实验是她的实验,从头到尾应该由她一人完成!

  林萧然也没闲着,他趁此功夫打开电脑,开始按照脑海中的记忆,查询起生物试剂供应商的联络方式。

  他在美津供职八年,在试剂小组工作,对于市场主流生物制剂供应商非常熟悉,查找起来相当轻松。

  不多时,一家家比较靠谱的试剂供应商,出现在屏幕,林萧然择重点记了下来。

  也许黄薇发现小师弟太好用了,用起来没有一点心理负担,因此,问题一个接着一个!

  “萧然,过滤好像需要气泵,我们实验室没有啊,其他教研室倒是有,但设备太大,不方便借来吧!”黄薇望看向林萧然,茫然问道。

  “用不上气泵,水抽子就行,那玩艺儿足够用!”林萧然侧过头,答道。

  “萧然,我们要用三角瓶吗?可是我们没有二氧化碳摇床,溶解氧怎么解决?”

  “知道我们没有二氧化碳摇床,就不摇了呗,用二氧化碳培养箱将就一下,溶解氧低的问题……,直接用平皿培养吧,增养基液较浅,有利于氧交换,同时还可以节省培养基,那东西挺贵的,省得陆老板心疼。”

  “在平皿里面……,放液体培养基?没有这样做过啊,感觉挺新鲜,能行吗?”

  ……

  “萧然,查资料的时候发现,有些培养基配方用到牛血清,有些却没有,为什么啊?”

  “在申请临床批文阶段,细胞基因重组表达抗体蛋白时,不允许培养基出现牛血清成分!”

  “到底采用哪种配方呢?”

  “我们只是做细胞悬浮驯化!”

  “也就是可以使用牛血清配方?”

  “……”林萧然。

  时间一分一秒过去,近两个小时,实验方法尚未完全缕清,但没关系,明天还可以继续完善,关键是,黄薇终于停下了手头工作。

  林萧然长长呼出一口气,暗叹,师姐不发怒的时候,同样麻烦!

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